职称论 - 至繁归于至简,专注职称考试和职称论文。 设为首页|加入收藏
当前位置:首页 > 职称论文 > 卫生药品类职称论文 > 药学专业职称论文 > 药学药师职称论文 > 正文

基于指纹图谱结合多成分定量分析的视疲宁片质量评价研究论文(附论文PDF版下载)

发布时间:2019-01-28 15:55:44 来源:职称论 我要评论














职称论(zhichenglun.com):
 
[摘要] 目的:建立视疲宁片(SPN)的 HPLC 特征指纹图谱,结合聚类分析、主成分分析、多成分定量分析,为其质量评价提供依据。方法:采用 AgilentC18 柱(250mm×4.60 mm,5μm),以流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱(0~15min,20%~25% 乙腈,20~25 min,25% ~45% 乙腈,25~30min,45% ~95% 乙腈);体积流量为1mL·min-1 ;检测波长为280nm;柱温30 ℃。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012年版)对10 批 SPN 指纹图谱进行相似度评价,对共有峰进行聚类分析与主成分析,并对指认的6种指标成分进行定量分析。结果:10 批 SPN HPLC 指纹图谱相似度均大于0.90,共20 个共有峰,各峰分离度较好。10批SPN 样品聚类分析与主成分分析结果具有一致性,且经主成分分析20 个共有峰可综合分为6 个主成分,累积方差贡献率为95.91% ;通过与对照品比对确定6种指标成分,分别为绿原酸(3号峰)、阿魏酸(5号峰)、橙皮苷(7号峰)、淫羊藿苷(12号峰)、橙黄决明素(18号峰)、大黄酚(20号峰),所建立的成分分析方法可用于6 种成分的含量测定。结论:HPLC 特征指纹图谱结合模式识别可反映SPN 的内在质量,建立的多成分定量分析方法对 SPN 的质量控制具有参考价值。
 
[关键词] 视疲宁片;指纹图谱;聚类分析;主成分分析;多成分定量分析

\
 
StudyonqualityevaluationofShipiningtabletsbyHPLCfingerprintandmulti-componentquan- titation
 
YANG Bao-hui1,LIU Tian-yi1,CHEN Ya-hui2, WANG Xin1, YANG Fei2,CAO Guang-shang1, ZHANG Xue-shun1,YANG Pei-min1 (1.Affiliated HospitalofShandong UniversityofTraditionalChinese Medicine, TheThirdGradeLa boratoryofChineseHerbaPreparationofStateAdministrationofTraditionalChineseMedicine,Shandong ResearchCenterofTraditionalChinese MedicinePreparationfor MedicalInstitutions,ShandongJinan250011,China;2. S handong UniversityofTraditionalChinese Medicine,ShandongJinan250355,China)
 
ABSTRACT:OBJECTIVE Toestablishthe HPLCchemicalfingerprintsofShipiningtabletsand makethe multicomponent quantitativeanalysistoprovidethebasisforitsqualityevaluationsbycombiningwithclusteranalysisandpr incipalcomponent analysis(PCA).METHODS Theanalysiswascarriedoutonananalyticalcolumn AgilentC18 (250 mm× 4.6 mm,5μm)
 
withgradientelutionbymethylcyanides(A)-0.1% phosphoricacidsolution (B)(0-15 min,20%-25% A;20-25 min,25%-
 
45% A;25-30min,45%-95% A),atthedetectionwavelengthof280nmandaflowrateof1.0mL/min.Thecolumntemper- aturewas30 ℃ .Additionally,fingerprintsimilarityof10batchesofShipiningtabletswasevaluatedbysoftware“S imilarityE- valuationSystemforChromatographicFingerprintofTCM”issuedbyGPC (Version2012).PCA wasusedforcommonpeaks. TheamountsofsixcharacteristiccomponentsinShipiningtabletswerealsosimultaneouslydeterm ined.RESULTS Thecom- monfingerprintpatternderivedfrom10batchesofsampleswasobtained withthesimilarityover0.90and20commonpeaks weredefined.TenBatchesSPN’sclusteranalysisresultsandPCAresultswerecoinciden t.AccordingtoPCA,the20peaks couldbeintegratedinto6principalcomponents,withcumulativecontributionrateofprincipalcomponentof95.91% .Mean- while,somecommonpeakswereidentifiedviapeakpattern matchedwithsta ndardsubstances,showingthatthepeak No.3, No.5,No.7,No.12,No.18andNo.20werechlorogenicacid,ferulicacid,hesperidin,icariin,aurantio-obtusinndandchry- sophanol.Thecompositionanalysismethodestablishedcoul dbeusedforthedeterminationofthecontentsof6components. CONCLUSION HPLCchemicalfingerprintscombined withpatternrecognitioncanreflecttheintrinsicqualityofSPN.And themulticomponentquantitativeanalysismeth odisofreferencevalueforthequalitycontrolofSPN.
 
KEY WORDS:Shipiningtablets;fingerprints;clusteranalysis;principalcomponentanalysis;multicomponent;quantitativea- nalysis

医疗机构中药制剂是中医临床经验的积累升华,是中医临床用药的重要组成,是中医药特色服务的优势所在,在中医临床服务中发挥着不可替代的重要作用。视疲宁片(SPN)是我院名优医疗机构制剂(鲁药制字Z01080501),具有近50 年的临床应用历史,由当归、淫羊藿、菊花、枸杞、决明子、陈皮、熟地等药味组成,具有滋补肝肾、健脑益气、养血明目的功效,用于治疗各种原因所致的视力疲劳。
 
2017年《中华人民共和国中医药法》正式颁布实施,其明确指出:“国家鼓励医疗机构根据本医疗机构临床用药需要配制和使用中药制剂”、“医疗机构对其配制的中药制剂的质量负责”,医疗机构制剂工作已成为医院药事服务工作的重点。然而目前国内医疗机构制剂整体水平较低,尤其是医疗机构制剂的质量控制水平存在较大的提升空间,因此对医疗机构制剂质控标准进行研究提高,建立科学合理的质控方法,对保证医疗机构制剂临床疗效、提升医疗机构制剂竞争力、保障人民健康水平具有重要的意义。
 
SPN 临床疗效确切,含有多种活性成分,其中当归含有挥发油、阿魏酸等,可补血养肝,缓解眼疲劳[1-3];淫羊藿中含淫羊藿苷、淫羊藿次苷等,可补肾阳,益肾精[4];菊花中含绿原酸,决明子中含橙黄决明素、大黄素、大黄酚等,可清肝明目[5-6];陈皮中含有挥发油、橙皮苷等,可益气补肾、明目安神。而原 质控标准仅对淫羊藿苷进行了含量测定,这显然不能满足药品质量评价的客观要求。本研究在分析当归、淫羊藿、菊花、决明子、陈皮等药味成分基础上, 建立了SPN HPLC 指纹图谱,对共有峰进行聚类分析与主成分分析,并与混合对照品图谱进行比对,指 认6个主要成分;与此同时,建立了6种主要成分同 时测定的定量分析方法,该方法灵敏、稳定,为 SPN 的系统评价和质量控制提供参考依据。
 
1 材 料
 
1.1  仪器 Aglient1260型高效液相色谱仪和工作站(美国 Aglient公司);KQ-500E 型超声波清洗器、 XMTD-4000型电热恒温水浴锅(昆山市超声波仪器有限公司);AB135-S型十万分之一天平、EP214C型万分之一电子天平(瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司);ThermoFisher移液枪(美国赛默飞世尔科技有限公司)。
 
1.2  试药  SPN10 批(山东中医药大学附属医院制剂室生产,0.3g/片,批 号 20170517、20170530、 20170704 、 20170715 、 20170812 、 20170828 、20170908、20170927、20171015、20171115);对照品绿原酸(批号 110753-201314,质量分数97.00% )、阿魏酸(批号 110773-201313,质量分数99.60% )、橙皮苷(批号 110721-201316,质量分数95.30% )、淫 羊 藿 苷 (批 号  MUST-14091213,质 量 分 数 98.00%)、橙黄决明素(批号 111900-201504,质量分数97.5% )、大黄酚(批号 1107968-201319,质量分数99.60%)均购自中国食品药品检定研究院。乙腈、甲醇、磷酸为色谱纯,水为纯净水,其他试剂均为分析纯。
 
2 方法与结果
 
2.1  色谱条件   色谱柱:AgilentC18 色谱柱(250 mm×4.60 mm,5μm);流动相:乙腈-0.1% 磷酸水溶液,梯度洗脱(0~15 min,20% ~25% 乙腈,20~ 25 min,25% ~45% 乙腈,25~30 min,45% ~95%乙腈);检 测 波 长:280 nm;体 积 流 量:1.0 mL·
min-1;柱温:30 ℃;进样量:10μL。
 
2.2  对照品溶液制备 取绿原酸、阿魏酸、橙皮苷、淫羊藿苷、橙黄决明素、大黄酚对照品适量,精密称 定,加甲醇制成混合对照品溶液(绿原酸、阿魏酸、橙皮苷、淫羊藿苷、橙黄决明素、大黄酚质量浓度分别为30.12,25.22,349.48,124.74,32.48,25.06μg·mL-1)。
 
2.3  供试品溶液制备  取SPN 适量,研细(过5 号筛),精密称定1.0g,置于具塞锥形瓶中,精密加入 50 mL70%的乙醇溶液,称重,超声处理30 min(功率250 W,频率35kHz),放冷,再次称重,以70%的乙醇溶液补足失重,摇匀,过滤,取续滤液,即得供试品溶液。
 
2.4  指纹图谱方法学考察
 
2.4.1 精密度试验 取批号为20170517(S1)的 SPN 适量,按照“2.3”项下的方法制备供试品溶液,按照“2.1”项下色谱条件连续进样6 次,记录色谱图。因淫羊藿苷峰形较好,保留时间稳定,面积适中,故选择淫羊藿苷峰为参照峰(S),计算得到各共有峰的相对保留时间 RSD 均小于0.8%、相对峰面积 RSD 均小于1.0%,且以第1 次进样色谱图为参照,6次进样采集到的图谱相似度达0.95以上,仪器精密度良好。
 
2.4.2  稳定性试验   取批号为20170517(S1)的 SPN 适量,按照“2.3”项下方法制备供试品溶液,并按照“2.1”项下色谱条件,于0,2,4,8,12,24h 进样,结果显示,以淫羊藿苷峰为参照峰(S),各共有峰的相对保留时间 RSD 均小于0.9%、相对峰面积 RSD 均小于1.3%,且6 次采集到的图谱相似度均达0.95以上,由此可见供试品溶液24h 内稳定性良好。
 
2.4.3 重复性试验 取批号为20170517(S1)的 SPN 适量,按“2.3”项下方法平行制备6 份供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件进行测定,结果显示,以淫羊藿苷峰为参照峰(S),各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的 RSD 均小于1.7%,6 份样品指纹图谱相似度均大于0.96,该方法重复性良好。 2.5  指纹图谱的研究
 
2.5.1  指纹图谱建立与相似度评价   取 10 批 SPN(S1~S10),按照“2.3”项下方法制备供试品溶液,并于“2.1”项下色谱条件进行测定,将测得的S1~S10 HPLC 色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012年版),以S5 HPLC 色谱图为参考图谱,用其余样品溶液所得 HPLC 色谱图与其作比较,根据匹配结果确定20 个共有峰,并生成对照指纹图谱,经计算,各批次样品的指纹图谱相似度均大于0.98。S1~S10SPN 指纹图谱与对照品指纹图谱见图1。
 
2.5.2  指纹图谱中主要色谱峰指认及相对峰面积计算 经相似度评价系统软件处理,于SPNS1~S10样品指纹图谱中检测到20个共有峰,与混合对照品图谱(图2)比对后,指认出6 个主要色谱峰,分别是绿原酸(3号峰)、阿魏酸(5 号峰)、橙皮苷(7 号峰)、淫羊藿苷(12号峰)、橙黄决明素(18 号峰)、大黄酚(20 号峰),其 保留时间分别为3.07,7.58,8.67, 12.86,20.21,27.27 min。且因12 号峰峰形较好,大小适宜,与相邻峰分离完全,故以12 号峰为参照峰,计算共有峰的相对峰面积,结果见表1。

\

2.6  系统聚类分析 本研究运用 SPSS19.0统计软件以10 批 SPN 的峰面积为变量,以 欧氏距离
(Euclideandistance)为区间,采用组间均连法,对10批SPN 指纹图谱进行系统聚类分析,结果如图3所示。由聚类分析树状图可知,10 批样品可聚为3类,S1、S3、S8 为一类,S5、S9 为一类,剩余5 批为一类。可见,聚类分析法既能全面、综合地反映10 批 SPN 样品 HPLC 色谱图之间的相似关系,又能反映不同批次产品之间的差异。

\

\

2.7  主成分分析

将10 批 SPN 样品的峰面积导 入SPSS19.0 统计软件,选用因子分析,采用主成分的方法,选择相关性矩阵,计算主成分特征值、累  积贡献率及主成分综合得分。相关系数特征值与方  差贡献率见表2,初始因子载荷矩阵见表3。将特征  值>1作为提取标准,可提取到6 个主成分,其中第1主成分特征值为6.560,方差贡献率为32.789%,第 2 主 成 分 特 征 值 为4.604,方 差 贡 献 率 为 23.022%;第3主成分特征值为2.878,方差贡献率为14.389%;第4主成分特征值为2.145,贡献率为 10.725%;第 5 主 成 分 为1.781,方 差 贡 献 率 为8.904%;第 6 主 成 分 为1.215,方 差 贡 献 率 为
6.075%。以 上 6 个 主 成分累积方差贡 献 率 为95.912%,可代表主要成分的大部分信息,如表3所示,峰1、5(阿魏酸)、7(橙皮苷)、9、14、19、20(大黄  酚)第1主成分的载荷较高,即这7个峰的信息可由 第1主成分反映;峰3(绿原酸)、5(阿魏酸)、10、11、13在第2主成分上载荷较高,故其信息可由第2 主成分反映;第3主成分主要反映了峰3(绿原酸)、17的信息。

\

\
 
此外,以 主成分为变量,运 用 SIMCA-P 软件(版本12.0)建立PCA 模型,经分析得到10批SPN样品2D 得分图与3D 得分图,如图4、图5所示。由图4、图5可知,10 批SPN 分散在图中的不同区域,但仍然可以看出主成分分析将10批制剂分成3类,即S1、S3、S8为一类,S5、S9 为一类,S2、S4、S6、S7、 S10为一类。此结果与10 批SPN 指纹图谱系统聚类分析结果一致。

\

2.8 SPN 中6种指标成分含量测定
 
2.8.1  色谱条件与“2.1”项下相同。
 
2.8.2  溶液的制备  按照“2.2”项下方法制备混合对照品溶液,按照“2.3”项下方法制备供试品溶液。

\

2.8.3  线性关系考察  分别精密吸取1,3,5,7,9,10 mL 混合对照品溶液,置于10 mL 量瓶中,分别用甲醇稀释至刻度,配制成系列浓度的混合对照品溶液,以“2.1”项下色谱条件测定,记录色谱图,以样品质量浓度(X)为横坐标,峰面积(Y)为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程和相关系数,结果见表4。

2.8.4  精密度试验  精密量取“2.2”项下的混合对照品溶液10μL,连续进样6 针,按“2.1”项下色谱条件测定,记录色谱图,并计算峰面积的 RSD。结果绿原酸、阿魏酸、橙皮苷、淫羊藿苷、橙黄决明素、大黄酚相应峰面积的 RSD 分别为1.42%、1.27%、 2.36%、1.18%、1.12%、1.49%,由此可见仪器精密度良好。
 
2.8.5  稳定性试验 取同一个批次的SPN(S1)供试品溶液,按照“2.1”项下色谱条件,分别于0,2,4, 6,8,12,24h 进样测定,数据显示,供试品溶液中绿原酸、阿魏酸、橙皮苷、淫羊藿苷、橙黄决明素、大黄酚峰面积的 RSD 分别为0.97%、1.71%、1.53%、 0.64%、1.69%、1.79%,说明本品24h 内稳定性良好。
 
2.8.6  重复性试验 取同一个批次的SPN(S1)适量,按照“2.3”项下的方法平行制备6 份供试品溶液,并以“2.1”项下色谱条件进行测定,结果显示,供试品中绿原酸、阿魏酸、橙皮苷、淫羊藿苷、橙黄决明素、大 黄 酚 含 量 的 RSD 分 别 为1.2%、0.87%、 0.46%、1.40%、0.76%、1.37%,可见本方法重复性良好。
 
2.8.7  加样回收率试验   取已知各指标成分含量的SPN 样品(S1)6 份,精密称定,每份0.5g,置具塞锥形瓶中,加入绿原酸、阿魏酸、橙皮苷、淫羊藿苷、橙黄 决 明 素、大黄酚对照品 溶 液 适 量,按 照“2.2.2”项下方法制备,过滤,取续滤液,备用;将所得续滤液,以“2.1”项下色谱条件进行测定,结果显示淫羊藿苷、橙黄决明素、大黄素、大黄酚的平均加样回收率分别为98.6%、98.9%、97.6%、96.8%、98.4%、99.1%,RSD 分 别 为 1.03%、0.91%、2.70%、0.87%、1.34%、1.43%,表明该方法的回收率良好。
 
2.8.8  样品测定 取 S1~S10 批次的 SPN 样品,按照“2.3”项 下方法分别制备供试品溶液,按 照 “2.1”项下色谱条件进行测定,根据标准曲线计算其中各指标成分量,结果如表5 所示。结果表明,10批SPN 样品中绿原酸的含量在2.52~3.21mg/片,阿魏酸的含量在1.54~1.91 mg/片,橙皮苷的含量 在25.69~29.06 mg/片,淫羊藿苷的含量在8.59~ 9.31 mg/片,橙黄决明素的含量在1.72~1.96 mg/片,大黄酚的含量在2.49~2.79 mg/片。
 
\

3 讨 论
 
本研究建立了SPN 的 HPLC 特征指纹图谱并对其进行相似度评价,在此基础上又采用聚类分析与主成分分析2种方法对10批SPN 样品数据进行分析,并与6 种指标性成分含量测定相结合,为直观、全面地评价SPN 质量提供了科学依据。数据显示,10 批SPN 样品的化学特征指纹相似度较好,所选的20个共有峰,相似度达0.90以上;经指认获得 6种指标性成分,分别为绿原酸、阿魏酸、橙皮苷、淫羊藿苷、橙黄决明素、大黄酚,且同时测定6 种指标性成分的方法简便可行、重复性好;经聚类分析与主成分分析,10 批 SPN 样品在2 种方法下的分析结果具有一致性,能够反映SPN 的内在质量,为 SPN 的质量控制研究奠定基础。
 
本课 题 组 对 乙 腈-0.2% 磷 酸 水 溶 液、乙 腈- 0.1%磷酸水溶液、乙腈-水溶液等流动相体系进行比较,对 254,270,280,284nm 等波长进行筛选。结果发现,以乙腈-0.1% 磷酸水溶液为流动相体系,以280nm 为检测波长,所获得的色谱图中色谱峰较多、基线平稳、峰形对称、分离效果好。同时对供 试品溶液的制备溶剂种类进行了考察,结果相同体积分数甲醇和乙醇提取效果相当,考虑成本和安全因素,选用乙醇进行考察,结果以70% 的乙醇溶液提取效果最佳。此外,本课题组对高效液相色谱仪及色谱柱品牌、柱温等因素也进行了考察,结果发现色谱峰分离情况良好,由此可见本课题组建立的方法耐用性较好。
 
目前医疗机构中药制剂质量标准相对落后,提高其质量控制水平是目前医疗机构中药制剂面临的首要问题。中药指纹图谱在反映中药制剂所含化学成分的种类、数量以及中药制剂的内在质量方面具有明显优势[6],目前已广泛应用于中药制剂的质控领域[7-14],同时采用液质、标准品对照等方法建立与功效相关的多成分含量测定方法,可完善中药制剂的质量控制体系。
 
参考文献:
 
[1] YanYL,Ji M,Song XY,etal.Theexperimentalstudyof DangguiShaoyao San’s protectiveinfluenceonthedyslipi- demiarats’vascularfunctionofendothelincells[J].ChinJExp MedFormul(中国实验方剂学杂志),2007,(2):25-28.
[2] NingKJ,ZhangZM,SiYY,etal.Electronmicroscopeobser- vationofradixangelicaesinensisonprotection withtheliver injurycausedbycarbontetrachloridein mice[J].ChinJExp MedFormul(中国实验方剂学杂志),2009,15(12):68-70.
[3] ZhangXC,CaiDW.ProtectiveeffectsofAngelicasinensisand itsactiveingredientson experimentalliverinjury[J].Chin HospPharmJ(中国医院药学杂志),2008,(9):739-741.
[4] Wang HZ,ChaiYH,ChenYZ,etal.Advancesinthestudyof thechemicalandpharmacologicaleffectsofEpimedium[J].A- sia-PacificTraditMed (亚太传统医药),2016,12(7):63-6
[5] JinLS,WengJY.Advancesinresearchanddevelopmentof
Cassiaobtusifolia[J].StraitPharm J (海峡药学),2012,24
(3):42-44.
[6] LiangXY,ChenSX,WuH.Developmenttrendofresearchon qualitycontroloftraditionalChinesemedicinepreparation[J]. ChinaPharm (中国药房),2014,25(3):280-283.
[7] XuF,LiMZ,SunY,etal.HPLCfingerprintanddetermina- tionofmulti-componentsinChitongXiaoyanlingGranules[J]. ChinTraditHerbDrug (中草药),2017,48(18):3748-3753.
[8] WangCL,JiangJW,HouGL.Fingerprintand multi-compo- nentsquantitativedeterminationforJizhiSyrupbyHPLC [J]. ChinTraditHerbDrug(中草药),2016,47(23):4192-4197.
[9] BaiB,XuJ,Guo LJ,etal.Fingerprintand multi-component quantificantionanalysisofXiaoyantabletsby HPLC[J].Chin J ModApplPharm(中 国现代应用药学),2017,34(2):258- 26
[10]ZhouJ,MoCL,ChenG,etal.Studyonthe HPLCfingerprint chromotogram ofcimicifugaerhizomaand cimicifuga species rootformulagranules[J].ChinJ ModApplPharm(中国现代应用药学),2018,25(2):252-255.
[11]Pan WD,Du YL,Zhang SN,etal.HPLC fingerprintand chemicalpatternrecognition ofScutellariaindica[J].Chin J Pharm Analysis(药物分析杂志),2015,35(2):250-254.
[12]Liang Y,WeiSG,Ru X,etal.Fingerprintswithhierarchical clusteranalysisforeasepillbygaschromatography[J].JJilin Univ (ScienceEdition)(吉林大学学报理学版),2010,48(4): 683-688.
[13]Liu X,HuangCY,YangYF,etal.HPLCfingerprintofdan’e
Fukangdecoctedextractbasedonhierarchicalclusteranalysis coupledwithprincipalcomponentanalysis[J].ChinJPharm(中国医药工业杂志),2016,47(11):1388-1393.
[14]NiuXH,Chen HY.Establishmentofthe UPLCfingerprint andanalysisofprincipalcomponentofQinghouLiyangranule[J].ChinaPharm (中国药房),2017,28(6):826-830.

《基于指纹图谱结合多成分定量分析的视疲宁片质量评价研究论文》附论文PDF版下载:
http://zhichenglun.com/uploadfile/2019/0128/20190128035832159.pdf
 
关注职称评审评定、职称论文创作发表,寻求职称论文修改润色、职称论文代发表职称期刊、专注出书、职称专利、职称考试等服务支撑,请锁定职称论

文章出自职称论转载请注明出处:http://zhichenglun.com/yaoxueyaoshizclw/1002.html
0

发表评论

职称论文发表 - 职称考试评审 - 职称论文期刊 - 职称评定 - 职称论文代发
Copyright © 职称论 版权所有 | 职称论手机版